農(nóng)產(chǎn)品粗蛋白的測定的測定方法【君翰銳儀】

開氏法

(一)方法要點(diǎn)

將樣品在催化劑參與下用硫酸消煮，使其中的有機(jī)氮——蛋白質(zhì)氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮——銨態(tài)氮后，加堿蒸出氨用2%硼酸吸收，然后用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定氨，得到氮的含量，再乘以系數(shù)，即得粗蛋白的含量。

(二)試劑

1.濃硫酸

2.40%氫氧化鈉溶液

3.2%硼酸吸收液

4.溴甲酚綠—甲基紅指示劑

5.混合催化劑 將五水硫酸銅10克、硫酸鉀100克在研缽中研細(xì)，混勻后全部通過40目篩。

6.0.0500摩/升鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

(三)分析步驟

1.消煮 準(zhǔn)確稱取風(fēng)干磨細(xì)通過40目篩的樣品0.5000克，放入100毫升開氏瓶(或君翰JH-BDN型凱氏定氮儀消化爐)中，加幾滴水潤濕樣品，加催化劑2克，加濃硫酸3～5毫升，輕輕搖勻內(nèi)容物，使混合均勻，放置數(shù)小時(shí)后加熱，在開氏瓶口置一小漏斗，在電爐上加熱，開始時(shí)用小火，待泡沫消失后再加大火力，保持內(nèi)容物沸騰。使內(nèi)容物回流液到開氏瓶口2/3處回流，消煮至溶液呈透明藍(lán)綠色后，再繼續(xù)消煮20～30分，豆類則繼續(xù)消煮60分，消煮結(jié)束后取下開氏瓶冷卻。

2.蒸餾 將開氏瓶(或凱氏定氮儀消化爐)中的消煮液用熱水全部洗入蒸餾瓶中(每次用少量熱水，多沖洗3～4次),總體積300毫升左右，連接蒸餾裝置，冷凝器的上端通過定氮球連接蒸餾瓶，冷凝器的下端插入盛有20毫升已調(diào)整好的2%硼酸接收液，檢查連接裝置是否漏氣，開啟冷卻水，從逸氣閥中加入40%氫氧化鈉溶液30毫升，立即塞緊，打開電爐開始蒸餾。蒸餾需30分左右，再換一盛有2%硼酸吸收液的三角瓶，若吸收液不變色即為蒸餾完畢，關(guān)閉電爐，打開逸氣閥，用蒸餾水沖洗冷凝管，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定硼酸吸收液由藍(lán)轉(zhuǎn)到淡紅色即為終點(diǎn)。

同時(shí)取無氮蔗糖0.5克代替樣品，同開始操做一樣做空白試驗(yàn)。

(四)結(jié)果計(jì)算

粗蛋白質(zhì)(%)=c×(V₁-V₀)×14×K×100/(m×1000)

式中：c——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度；

V₁——樣品滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(毫升);

V₀——空白蔗糖代替樣品滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(毫升);

14——氮的摩爾質(zhì)量(克);

K——換算因數(shù)；

m——樣品的質(zhì)量(克)。

幾種作物子粒蛋白質(zhì)換算因數(shù)，見表。

表幾種作物子粒蛋白質(zhì)換算因數(shù)

由于在測定中未經(jīng)蛋白質(zhì)分離沉淀，其中包括游離的氨基酸、酰胺等含氮非蛋白質(zhì)化合物，故一般用此法測得的蛋白質(zhì)為粗蛋白質(zhì)。